骨切片是一種很有活力的組織，在人的一生中都在不斷地重建?，F(xiàn)已證實(shí)，在骨中存在一些特殊物質(zhì)，能夠影響到破骨細(xì)胞的活性。每批骨切片通過(guò)重吸收檢測(cè)法來(lái)測(cè)試其質(zhì)量。在該檢測(cè)中，由骨切片上產(chǎn)生凹點(diǎn)證明破骨能力。隨后用培養(yǎng)基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測(cè)上清液。只有當(dāng)兩項(xiàng)測(cè)試都呈陽(yáng)性時(shí)，該骨切片才能用于進(jìn)一步的重吸收檢測(cè)。破骨細(xì)胞產(chǎn)生凹點(diǎn)的活性通過(guò)人破骨重吸收方法檢測(cè)。對(duì)破骨重吸收的定量分析可以采用傳統(tǒng)的對(duì)凹點(diǎn)染色方法，亦可使用培養(yǎng)基酶免吸附檢測(cè)法Crosslaps，兩者關(guān)系見圖1與2。由于破骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn)往往需要較大量的蛋白質(zhì)，而從牛骨切片中提取的蛋白質(zhì)用于96孔板，IDS公司開發(fā)了能夠適用于6，12，24，48孔板的骨皮質(zhì)切片。如圖3所示。將人破骨細(xì)胞分散覆蓋于牛骨皮質(zhì)片上，然后加入不同濃度的抗重吸收劑（A:90μM,B:30μM,C:10μM,D:0μM）。第6天取等量細(xì)胞培養(yǎng)上清液用于檢測(cè)膠原c端交聯(lián)肽（ctx）的量（培養(yǎng)基ELISA-CrossLaps）,從骨片上轉(zhuǎn)移破骨細(xì)胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色，形成可見的凹點(diǎn)（圖1）。用這種6孔板大骨片（GBS）來(lái)提取破骨細(xì)胞蛋白，這些破骨細(xì)胞在骨上而非塑料上培養(yǎng)，對(duì)蛋白質(zhì)的表達(dá)是有影響的（數(shù)據(jù)未列出）。要進(jìn)行破骨細(xì)胞的基因描述實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們推薦使用這些底物提取RNA。從骨切片分離RNA的方案和人破骨細(xì)胞的培養(yǎng)方案可根據(jù)要求制定.

　　【來(lái)源】骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成，適合96孔板，直徑6mm，大概200μm厚?！緝?chǔ)存】骨切片保存于4°C下70%乙醇中。為了保持骨切片的質(zhì)量，應(yīng)縮短使用周期和避免室溫下放置。【處理】推薦在轉(zhuǎn)移至96孔板之前，先將骨切片置于含培養(yǎng)基的10%血清中清洗三次?！九囵B(yǎng)】重吸收實(shí)驗(yàn)一般持續(xù)72小時(shí)（見圖2）。然而在加入試劑到破骨細(xì)胞培養(yǎng)液中16或24小時(shí)后，就可觀察到細(xì)微的變化了，甚至8小時(shí)后即可用相應(yīng)方法觀察到。【特征】與凹點(diǎn)染色和劃線不同，培養(yǎng)基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細(xì)胞培養(yǎng)的終止。因此，可以從相同的股切片中獲得幾個(gè)樣品，從而使互換性檢測(cè)特定物質(zhì)影響下的破骨細(xì)胞活性成為可能。材料的處置與常見細(xì)胞培養(yǎng)物的處置相同。

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